2人で遊べば、お互いの苦手なコースをクリアしあうなど、協力プレイを楽しむことができます。

2人で遊ぶ場合は、1Pがマリオ、2Pがルイージを操作します。最初は1Pがプレイし、コースをクリアするかミスすると2Pの順番になります。なお、どちらかのプレイヤーが中間ゲートを通過している場合、もう一方のプレイヤーが同じコースを始めると、途中からプレイできます。

マップ画面でかを押すと右の画面が表示され、プレイヤーの残り数をあげたりもらうことができます。相手に残り数をあげる場合は、もらう場合はを押してください。を押すとマップ画面に戻ります。なお、どちらかのプレイヤーがゲームオーバーになったときもこの画面が表示されます。